თხევადი ქრომატოგრაფიით რაოდენობრივი ანალიზის პრინციპები და მეთოდები

თხევადი ქრომატოგრაფიის გამოყოფის მექანიზმი ემყარება ნარევში კომპონენტების აფინურობის განსხვავებას ორ ფაზაში.

სხვადასხვა სტაციონარული ფაზის მიხედვით, თხევადი ქრომატოგრაფია იყოფა თხევად-მყარ ქრომატოგრაფიად, თხევად-თხევადი ქრომატოგრაფიად და შეკრულ ფაზურ ქრომატოგრაფიად.ყველაზე ფართოდ გამოიყენება თხევად-მყარი ქრომატოგრაფია სილიკა გელით, როგორც შემავსებელი და შეკრული ფაზის ქრომატოგრაფია მიკროსილიციით, როგორც მატრიქსი.

სტაციონარული ფაზის ფორმის მიხედვით თხევადი ქრომატოგრაფია შეიძლება დაიყოს სვეტის ქრომატოგრაფიად, ქაღალდის ქრომატოგრაფიად და თხელი ფენის ქრომატოგრაფიად.ადსორბციული შესაძლებლობების მიხედვით, ის შეიძლება დაიყოს ადსორბციულ ქრომატოგრაფიად, დანაყოფის ქრომატოგრაფიად, იონგაცვლის ქრომატოგრაფიად და გელის გამტარიან ქრომატოგრაფიად.

ბოლო წლებში, თხევადი სვეტის ქრომატოგრაფიის სისტემას დაემატა მაღალი წნევის სითხის ნაკადის სისტემა, რათა მობილური ფაზა სწრაფად მიედინებოდეს მაღალი წნევის ქვეშ, გამყოფი ეფექტის გასაუმჯობესებლად, ამიტომ მაღალი ეფექტურობის (ასევე ცნობილი როგორც მაღალი წნევის) თხევადი ქრომატოგრაფია. გაჩნდა.

ნაწილი
01 თხევადი ქრომატოგრაფიის რაოდენობრივი ანალიზის პრინციპი

ხარისხობრივ საფუძველზე რაოდენობრივად გასაზომად საჭიროა სუფთა ნივთიერებები, როგორც სტანდარტები;

თხევადი ქრომატოგრაფიის რაოდენობრივი განსაზღვრა შედარებით რაოდენობრივი მეთოდია: ანუ ნარევში ანალიზის რაოდენობა შეფასებულია სუფთა სტანდარტული ნიმუშის ცნობილი რაოდენობით.

ნაწილი
02 თხევადი ქრომატოგრაფიით რაოდენობრივი განსაზღვრის საფუძველი

გაზომილი კომპონენტის რაოდენობა (W) პროპორციულია პასუხის მნიშვნელობის (A) (პიკის სიმაღლე ან პიკის ფართობი), W=f×A.

რაოდენობრივი კორექტირების კოეფიციენტი (f): ეს არის რაოდენობრივი გამოთვლის ფორმულის პროპორციულობის მუდმივი და მისი ფიზიკური მნიშვნელობა არის გაზომილი კომპონენტის რაოდენობა, რომელიც წარმოდგენილია საპასუხო ერთეულის მნიშვნელობით (პიკის ფართობი).

რაოდენობრივი კორექტირების ფაქტორი შეიძლება მივიღოთ სტანდარტული ნიმუშის ცნობილი რაოდენობით და მისი პასუხის მნიშვნელობიდან.

გაზომეთ უცნობი კომპონენტის საპასუხო მნიშვნელობა და კომპონენტის რაოდენობა შეიძლება მიიღოთ რაოდენობრივი კორექტირების ფაქტორით.

ნაწილი
03 საერთო ტერმინები რაოდენობრივ ანალიზში

ნიმუში (ნიმუში): ხსნარი, რომელიც შეიცავს ანალიზს ქრომატოგრაფიული ანალიზისთვის.დაყოფილია სტანდარტულ და უცნობ ნიმუშებად.

სტანდარტი: სუფთა პროდუქტი ცნობილი კონცენტრაციით.უცნობი ნიმუში (უცნობი): ნარევი, რომლის კონცენტრაციაც შესამოწმებელია.

ნიმუშის წონა: შესამოწმებელი ნიმუშის ორიგინალური აწონვა.

განზავება: უცნობი ნიმუშის განზავების ფაქტორი.

კომპონენტი: რაოდენობრივად გასაანალიზებელი ქრომატოგრაფიული პიკი, ანუ ანალიზი, რომლის შემცველობა უცნობია.

კომპონენტის რაოდენობა (თანხა): შესამოწმებელი ნივთიერების შემცველობა (ან კონცენტრაცია).

მთლიანობა: კომპიუტერის მიერ ქრომატოგრაფიული პიკის პიკის ფართობის გაზომვის გამოთვლითი პროცესი.

კალიბრაციის მრუდი: კომპონენტის შემცველობის წრფივი მრუდი პასუხის მნიშვნელობის მიმართ, დადგენილი სტანდარტული ნივთიერების ცნობილი რაოდენობით, რომელიც გამოიყენება ანალიზის უცნობი შემცველობის დასადგენად.

ნაწილი
04 თხევადი ქრომატოგრაფიის რაოდენობრივი ანალიზი

1. აირჩიეთ რაოდენობრივი ანალიზისთვის შესაფერისი ქრომატოგრაფიული მეთოდი:

l დაადასტურეთ აღმოჩენილი კომპონენტის პიკი და მიაღწიეთ გარჩევადობას (R) 1,5-ზე მეტი

l განსაზღვრეთ შემოწმებული კომპონენტების ქრომატოგრაფიული მწვერვალების თანმიმდევრულობა (სისუფთავე)

l მეთოდის გამოვლენის და რაოდენობრივი ლიმიტის განსაზღვრა;მგრძნობელობა და ხაზოვანი დიაპაზონი

2. დაადგინეთ კალიბრაციის მრუდი სხვადასხვა კონცენტრაციის სტანდარტული ნიმუშებით

3. შეამოწმეთ რაოდენობრივი მეთოდების სიზუსტე და სიზუსტე

4. გამოიყენეთ შესაბამისი ქრომატოგრაფიის მართვის პროგრამული უზრუნველყოფა ნიმუშების შეგროვების, მონაცემთა დამუშავებისა და შედეგების მოხსენების განსახორციელებლად

ნაწილი
05 რაოდენობრივი პიკების იდენტიფიცირება (ხარისხობრივი)

ხარისხობრივად იდენტიფიცირება თითოეული ქრომატოგრაფიული პიკი რაოდენობრივად

პირველ რიგში, გამოიყენეთ სტანდარტული ნიმუში, რათა დადგინდეს რაოდენობრივი ქრომატოგრაფიული პიკის შეკავების დრო (Rt).შეკავების დროის შედარებით, იპოვეთ კომპონენტი, რომელიც შეესაბამება თითოეულ ქრომატოგრაფიულ პიკს უცნობ ნიმუშში.ქრომატოგრაფიული თვისებრივი მეთოდი არის შეკავების დროის შედარება სტანდარტულ ნიმუშთან.კრიტერიუმი არასაკმარისიშემდგომი დადასტურება (ხარისხობრივი)

1. სტანდარტული დამატების მეთოდი

2. გამოიყენეთ სხვა მეთოდები ერთდროულად: სხვა ქრომატოგრაფიული მეთოდები (შეცვალეთ მექანიზმი, როგორიცაა: სხვადასხვა ქრომატოგრაფიული სვეტების გამოყენება), სხვა დეტექტორები (PDA: სპექტრის შედარება, სპექტრის ბიბლიოთეკის ძიება; MS: მასობრივი სპექტრის ანალიზი, სპექტრის ბიბლიოთეკის ძიება)

3. სხვა ინსტრუმენტები და მეთოდები

ნაწილი
06 რაოდენობრივი პიკის კონსისტენციის დადასტურება

დაადასტურეთ ქრომატოგრაფიული პიკური თანმიმდევრულობა (სიწმინდე)

დარწმუნდით, რომ თითოეული ქრომატოგრაფიული პიკის ქვეშ არის მხოლოდ ერთი გაზომილი კომპონენტი

შეამოწმეთ ჩარევა თანაგამომრეცხავი ნივთიერებებისგან (მინარევებისაგან)

ქრომატოგრაფიული პიკის კონსისტენციის (სიწმინდის) დადასტურების მეთოდები

სპექტროგრამების შედარება ფოტოდიოდური მატრიცის (PDA) დეტექტორებთან

პიკის სისუფთავის იდენტიფიკაცია

2996 სიწმინდის კუთხის თეორია

რაოდენობრივი მეთოდები, რომლებიც ჩვეულებრივ გამოიყენება ნაწილ 07-ში

სტანდარტული მრუდის მეთოდი, დაყოფილია გარე სტანდარტულ მეთოდად და შიდა სტანდარტის მეთოდად:

1. გარე სტანდარტის მეთოდი: ყველაზე მეტად გამოიყენება თხევადი ქრომატოგრაფიაში

ცნობილი კონცენტრაციების სტანდარტული ნიმუშების სერია მომზადდა სტანდარტული ნიმუშების შესამოწმებლად ნაერთების სუფთა ნიმუშების გამოყენებით.შეყვანილია სვეტში მის საპასუხო მნიშვნელობამდე (პიკის ფართობი).
გარკვეული დიაპაზონის ფარგლებში, არსებობს კარგი წრფივი კავშირი სტანდარტული ნიმუშის კონცენტრაციასა და პასუხის მნიშვნელობას შორის, კერძოდ, W= f×A, და მზადდება სტანდარტული მრუდი.

ზუსტად იმავე ექსპერიმენტულ პირობებში, შეიტანეთ უცნობი ნიმუში, რათა მიიღოთ გასაზომი კომპონენტის პასუხის მნიშვნელობა.ცნობილი კოეფიციენტის f-ის მიხედვით, შეიძლება მივიღოთ გასაზომი კომპონენტის კონცენტრაცია.

გარე სტანდარტის მეთოდის უპირატესობები:მარტივი ოპერაცია და გაანგარიშება, ეს არის ხშირად გამოყენებული რაოდენობრივი მეთოდი;არ არის საჭირო თითოეული კომპონენტის აღმოჩენა და გამორეცხვა;საჭიროა სტანდარტული ნიმუში;სტანდარტული ნიმუშისა და უცნობი ნიმუშის გაზომვის პირობები უნდა იყოს თანმიმდევრული;ინექციის მოცულობა უნდა იყოს ზუსტი.

გარე სტანდარტული მეთოდის ნაკლოვანებები:ექსპერიმენტული პირობები უნდა იყოს მაღალი, როგორიცაა დეტექტორის მგრძნობელობა, ნაკადის სიჩქარე და მობილური ფაზის შემადგენლობა არ შეიძლება შეიცვალოს;თითოეული ინექციის მოცულობას უნდა ჰქონდეს კარგი განმეორებადობა.

2. შიდა სტანდარტის მეთოდი: ზუსტი, მაგრამ პრობლემური, ყველაზე მეტად გამოიყენება სტანდარტულ მეთოდებში

შიდა სტანდარტის ცნობილი რაოდენობა ემატება სტანდარტს შერეული სტანდარტის შესაქმნელად და მომზადებულია ცნობილი კონცენტრაციის სამუშაო სტანდარტების სერია.სტანდარტის მოლური თანაფარდობა შიდა სტანდარტთან შერეულ სტანდარტში უცვლელი რჩება.შეიტანეთ ქრომატოგრაფიულ სვეტში და მიიღეთ (სტანდარტული ნიმუშის პიკის ფართობი/შიდა სტანდარტული ნიმუშის პიკის ფართობი), როგორც პასუხის მნიშვნელობა.პასუხის მნიშვნელობასა და სამუშაო სტანდარტის კონცენტრაციას შორის წრფივი დამოკიდებულების მიხედვით, კერძოდ, W= f×A, დგება სტანდარტული მრუდი.

შიდა სტანდარტის ცნობილი რაოდენობა ემატება უცნობ ნიმუშს და შეჰყავთ სვეტში გასაზომი კომპონენტის საპასუხო მნიშვნელობის მისაღებად.ცნობილი კოეფიციენტის f-ის მიხედვით, შეიძლება მივიღოთ გასაზომი კომპონენტის კონცენტრაცია.

შიდა სტანდარტის მეთოდის მახასიათებლები:ოპერაციის დროს ნიმუში და შიდა სტანდარტი ურევენ ერთმანეთს და შეჰყავთ ქრომატოგრაფიულ სვეტში, ასე რომ, სანამ გაზომილი კომპონენტის რაოდენობის შეფარდება შერეულ ხსნარში შიდა სტანდარტთან მუდმივია, ნიმუშის მოცულობა იცვლება. არ იმოქმედებს რაოდენობრივ შედეგებზე..შიდა სტანდარტის მეთოდი ანაზღაურებს ნიმუშის მოცულობის გავლენას და მობილურ ფაზასა და დეტექტორსაც კი, ამიტომ ის უფრო ზუსტია, ვიდრე გარე სტანდარტული მეთოდი.

ნაწილი
08 რაოდენობრივი ანალიზის შედეგებზე მოქმედი ფაქტორები

ცუდი სიზუსტე შეიძლება გამოწვეული იყოს:

პიკის არეალის არასწორი ინტეგრაცია, ნიმუშის დაშლა ან მინარევები შეტანილი ნიმუშის მომზადების დროს, ნიმუშის ფლაკონი არ არის დალუქული, ნიმუშის ან გამხსნელის აორთქლება, ნიმუშის არასწორი მომზადება, ნიმუშის ინექციის პრობლემები, არასწორი შიდა სტანდარტის მომზადება

ცუდი სიზუსტის შესაძლო მიზეზები:

პიკის არასწორი ინტეგრაცია, ინექციის ან ინჟექტორის პრობლემები, ნიმუშის დაშლა ან მინარევები, რომლებიც წარმოიქმნება ნიმუშის მომზადების დროს, ქრომატოგრაფიული პრობლემები, დეგრადირებული დეტექტორის პასუხი